基因编辑技术的飞速发展, 特别是近年来CRISPR技术的广泛应用,使得人类拥有了前所未有的改变和修饰基因组的能力。CRISPR技术来源于细菌本身对抗噬菌体的“免疫系统”,这项技术利用单链引导RNA(sgRNA)和Cas9蛋白,可以在体内和体外简单、迅速、低成本实现基因编辑。利用CRISPR技术不仅可以对编码基因进行有效编辑和基因组的大规模筛选,而且还可以结合NGS对非编码RNA(ncRNA)进行功能研究。

CRISPR技术已经广泛应用于全球各个实验室,几乎可以对所有细胞系和大多数常用实验动物的遗传物质进行改造。CRISPR技术在人类遗传性疾病、病毒感染疾病和癌症的相关研究中具有广阔前景和巨大发展潜力。

哺乳动物细胞基因/基因组编辑操作流程

哺乳动物基因编辑流程

哺乳动物细胞基因/基因组编辑研究思路

1.哺乳动物细胞基因敲除(knock-out) /敲入(knock-in)

研究思路
  1. 基因组定制化的
    sgRNA设计
  2. 基因组或者Panel
    范围内的基因调取
    与sgRNA设计
  1. Syno? 2.0基因合
    与载体构建平台
  2. ?Syno?3.0sgRNA
    文库构建平台
  3. ?多模式物种的载体
    序列设计
  1. 体外sgRNA活性验证
  2. 体内sgRNA活性验证
  1. 稳定细胞株构建
  2. 基因敲除动物模型构建

2.哺乳动物细胞非编码RNA功能研究

哺乳动物细胞非编码RNA功能研究
  1. 基因组或者Panel
    范围内的基因调取
    与pg-sgRNA设计
  1. Syno?2.0基因合成载体
    构建
    平台
  2. Syno? 3.0 sgRNA文库构建
  3. 多模式物种的载体序列设计
  1. 慢病毒文库包装
  2. NGS验证文库质量
  1. 筛选前后NGS数据对比
  2. 细胞株构建或动物模型建立

哺乳动物基因编辑服务优势

right一站式服务
泓迅科技提供从sgRNA设计、合成及活性检测,到稳定细胞株或动物模型构建和筛选的整体解决方案

right专利的技术平台
拥有专利的sgRNA设计软件,能够高效准确提供多物种序列设计方案

rightsgRNA文库合成
拥有专利的Syno? 3.0芯片合成平台,文库构建覆盖率95%以上

right高通量功能筛选平台
可提供全基因组文库高通量筛选,可平行分析大量细胞的基因功能,鉴定相关的候选基因

哺乳动物细胞基因/基因组编辑应用案例

【泓迅案例】 构建人类sgRNA文库

【应用案例1】哺乳动物细胞CRISPR-Cas9的基因编辑

【应用案例2】 CRISPR-Cas9系统用于lncRNA基因的高通量功能筛选

参考文献
Ran, F.A., et al., Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols, 2013. 8(11): p. 2281-2308